METEOR系統(tǒng)介紹

METEOR是一款獲獎(jiǎng)的熒光顯微鏡（FLM），可以直接集成到特定的冷凍聚焦離子束（FIB）/掃描電鏡（SEM）腔室中。METEOR支持原位冷凍光電聯(lián)用（cryo-CLEM），并能輕松適應(yīng)您的工作流程。它不僅減少了顯微鏡之間的轉(zhuǎn)移步驟，保護(hù)脆弱的樣品免受不必要的污染，還允許您在銑削過程中和之后成像感興趣區(qū)域（ROI）。通過減少當(dāng)前繁瑣的工作流程中的轉(zhuǎn)移步驟，METEOR可以大大降低冷凍關(guān)聯(lián)顯微技術(shù)工作流程的復(fù)雜性。您的樣品薄切片制備工作流程將簡(jiǎn)化到7個(gè)制造步驟：加載樣品，然后捕獲熒光顯微圖像和掃描電鏡圖像，且無需進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移，在系統(tǒng)將兩個(gè)圖像自動(dòng)關(guān)聯(lián)后，直接移至目標(biāo)區(qū)域，在完成薄切片研磨之后，用熒光顯微鏡確認(rèn)感興趣區(qū)域是否完好。

對(duì)于冷凍電子斷層掃描（cryo-ET）工作流程，這使得驗(yàn)證感興趣區(qū)域（ROI）是否包含在樣品中成為可能。不僅來自樣品的熒光標(biāo)記（FLM）信號(hào)確認(rèn)了目標(biāo)蛋白質(zhì)正在通過冷凍電子斷層掃描（cryo-ET）被解析，它還使寶貴的透射電鏡（TEM）機(jī)時(shí)能更好地用于有用的樣品。在“銑削和觀察”工作流程中，隨著更多材料被銑削，可在原位獲取熒光標(biāo)記（FLM）數(shù)據(jù)，從而在整個(gè)生物材料體積中提高功能和結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的相關(guān)性。

冷凍cryo-ET和體積冷凍CLEM在細(xì)胞生物學(xué)、病毒學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)和藥物開發(fā)領(lǐng)域都能揭示新的見解。通過冷凍電鏡獲得的深刻見解有助于在接近天然的細(xì)胞環(huán)境中以亞納米分辨率揭示生物結(jié)構(gòu)。不僅無需蛋白質(zhì)純化，該技術(shù)還允許觀察蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-藥物相互作用。因此，冷凍電鏡有可能提供更有效和針對(duì)性的藥物設(shè)計(jì)流程，并加速藥物開發(fā)進(jìn)程。借助體積CLEM，可獲取整個(gè)細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)信息，提供更全面的視角。細(xì)胞器形態(tài)的變化及其分布可輕松追溯到蛋白質(zhì)表達(dá)的水平和位置。

很不幸，通過冷凍cryo-ET和體積cryo-CLEM獲取有用見解的速度受到了其復(fù)雜流程的阻礙。當(dāng)前工作流程包括先用獨(dú)立的冷凍熒光顯微鏡cryo-FLM對(duì)樣品進(jìn)行成像，再將其轉(zhuǎn)移到cryo-FIB設(shè)備中，這一過程可能會(huì)非常繁瑣和令人沮喪。樣品轉(zhuǎn)移過程中可能造成的樣品損壞和污染，以及在材料被銑削去除時(shí)難以檢查樣品，這些都對(duì)成功獲取良好數(shù)據(jù)造成了嚴(yán)重影響。這些挑戰(zhàn)以及冷凍cryo-ET和體積冷凍關(guān)聯(lián)顯微鏡CLEM的巨大潛力，激勵(lì)我們開發(fā)解決方案，以簡(jiǎn)化流程并讓研究者充分發(fā)揮潛力。

使用METEOR引導(dǎo)薄片制備時(shí)，用戶先將樣品裝載至配備METEOR的cryo-FIB中。隨后將電鏡載物臺(tái)移至METEOR位置，獲取全景圖像和高精度Z軸堆棧，從而定位目標(biāo)區(qū)域(ROI)。接著移動(dòng)載物臺(tái)至SEM位置采集同一ROI的SEM圖像。通過圖像關(guān)聯(lián)分析，用戶可確定薄片制備位置并啟動(dòng)銑削。在銑削過程中及完成后，均可根據(jù)熒光信號(hào)驗(yàn)證薄片中的ROI存在性，之后再將樣品轉(zhuǎn)移至冷凍透射電鏡(cryo-TEM)。薄片的熒光顯微鏡(FLM)信號(hào)不僅能確認(rèn)目標(biāo)蛋白質(zhì)正被冷凍電子斷層掃描(cryo-ET)解析，還可確保寶貴的透射電鏡(TEM)機(jī)時(shí)僅用于有用的樣品。

在三維冷凍光電聯(lián)用成像中，樣品先通過METEOR進(jìn)行成像以確定目標(biāo)區(qū)域(ROI)。隨后使用掃描電鏡(SEM)獲取ROI的高對(duì)比度圖像，接著用聚焦離子束(FIB)刻蝕樣品表層，之后再次使用SEM對(duì)剛暴露的表面進(jìn)行成像。這種"銑削-觀察"工作流程將在整個(gè)樣品體積內(nèi)重復(fù)進(jìn)行。借助METEOR，隨著更多材料被銑削去除，可以持續(xù)監(jiān)測(cè)ROI的熒光信號(hào)，從而在整個(gè)生物材料體積內(nèi)實(shí)現(xiàn)功能與結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)性優(yōu)化。

METEOR系統(tǒng)由3個(gè)主要部分組成：電子機(jī)架（放置在顯微鏡房間內(nèi)）、主體（安裝在FIB/SEM聚焦離子束雙束電鏡的一個(gè)端口上）和電鏡腔室內(nèi)光學(xué)器件（安裝在FIB/SEM腔室內(nèi)）。METEOR系統(tǒng)配有一臺(tái)控制PC及一套ODEMIS采集軟件，用于系統(tǒng)控制及熒光圖像的采集。

Delmic冷凍解決方案還包括：

CERES Clean Station 清潔的制備工作站: 在定制的高效清潔站中制備低溫EM樣品，以完全防止冰污染；每一步都在無水手套箱（濕度<1%/1ppm水）中輕松制備低溫EM樣品。

CERES Ice Shield 冰盾：在冷凍薄片制備過程中提供終極保護(hù)，防止冰污染；采用專有技術(shù)，在薄片研磨過程中保護(hù)您的低溫樣品免受寄生冰的生長(zhǎng)；使冷凍FIB制備更多無冰污染的薄片，以獲得高質(zhì)量的斷層圖像和高通量。

CERES Vitri-Lock 高真空低溫傳輸模塊：可實(shí)現(xiàn)安全無冰污染的低溫樣品轉(zhuǎn)移；在CERES制備工作站和CryoFIB之間在高真空下傳輸?shù)蜏貥悠罚�以盡量減少轉(zhuǎn)移過程中水分的存在；采用主動(dòng)冷卻方式，樣品可以保持玻璃化狀態(tài)長(zhǎng)達(dá)30分鐘。

METEOR 2.0 系統(tǒng)介紹

METEOR 2.0是新一代冷凍熒光顯微鏡系統(tǒng)，專為無縫集成至冷凍聚焦離子束 (cryo-FIB) 而設(shè)計(jì)。該系統(tǒng)可在高真空腔體內(nèi)直接進(jìn)行熒光成像，省去不必要的樣品轉(zhuǎn)移步驟，從而降低冰污染、樣品失玻璃化以及其他損傷的風(fēng)險(xiǎn)。METEOR 2.0為用戶提供簡(jiǎn)化且可靠的工作流程，滿足不斷發(fā)展的冷凍電子斷層掃描 (cryo-ET) 研究需求，確保薄片制備過程高效、精準(zhǔn)且無污染。