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| 一種魚類家系建立和抗病高產(chǎn)良種選育方法，采用群體選育、家系選育、雜交以及人工感染、快速生長家系和抗病家系的篩選等技術(shù)，選育出了牙鲆抗病方強(qiáng)、生長快的家系，建立了魚類抗病高產(chǎn)良種的選育方法。該技術(shù)具有針對(duì)性強(qiáng)、選育效率高、效果明顯等特點(diǎn)，抗病牙鲆魚苗的成活率為８０％以上，成活率比普通牙鲆魚苗提高了３０％以上；抗病牙鲆的生長速度也提高了１０％以上。為魚類抗病品種培育開辟了新的技術(shù)途徑，是一種能在魚類良種選育中應(yīng)用的抗病高產(chǎn)品種選育方法，適宜在所有養(yǎng)殖魚類上推廣應(yīng)用，對(duì)養(yǎng)殖魚類抗病高產(chǎn)良種培育具有重要意義和應(yīng)用價(jià)值。 |
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魚類家系建立和抗病高產(chǎn)良種選育方法
一種魚類家系建立方法，其特征在于它的技術(shù)內(nèi)容包括：（１）、抗病群體的制備；（２）、魚類家系的建立；（３）、不同家系的標(biāo)記方法； （１）、抗病群體的制備：采用自然選擇和人工感染途徑獲得抗病群體（ＲＳ）； 自然選擇：在發(fā)病旺季，收集弧菌病發(fā)病后存活的魚苗和魚種個(gè)體，進(jìn)行培養(yǎng)； 人工感染途徑：用病原菌鰻弧菌感染牙鲆普通魚苗：魚苗體重為１５－２０克／尾； 鰻弧菌為本實(shí)驗(yàn)室保存的鰻弧菌菌株，鰻弧菌的培養(yǎng)基為２２１６Ｅ，將鰻弧菌接種在滅菌的２２１６Ｅ培養(yǎng)基中，置于震動(dòng)速度為２００ｒ／ｍ的搖床上，于２８℃下進(jìn)行培養(yǎng)，２０小時(shí)后測(cè)定ＯＤ６００值，離心收集菌體，將原菌液用滅菌的０．９％ＮａＣｌ生理鹽水稀釋成濃度為１０ ＯＤ的菌液；２２１６Ｅ培養(yǎng)基的配方是：蛋白胨５ｇ，酵母提取物１ｇ，ＦｅＰＯ↓［４］·４Ｈ↓［２］Ｏ０．１ｇ，陳海水１０００ｍＬ； 用上述菌液進(jìn)行預(yù)感染實(shí)驗(yàn)：先用生理鹽水將１０ ＯＤ濃度的菌液分別按５０、１００、１２０、１５０、２４０和３００倍，稀釋成不同的濃度進(jìn)行預(yù)備實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度注射１０尾１５－２０克重的魚苗，注射量為０．３－０．５ｍＬ；將引起注射的魚苗中５０－６０％的魚苗死亡的濃度確定為半致死濃度；上述規(guī)格的魚苗的半致死濃度為０．３－０．５ｍＬ的稀釋２４０倍的細(xì)菌溶液； 感染實(shí)驗(yàn)：正式感染試驗(yàn)用魚苗共８００多尾，體重約１５－２０ｇ，魚苗實(shí)行腹腔注射鰻弧菌，注射劑量控制在半致死濃度，鰻弧菌溶液的注射量為０．０２ｍｌ菌液／克魚；感染時(shí)水溫控制在２１－２３℃； 抗病群體為自然選擇或人工感染鰻弧菌后長期健康成活的牙鲆個(gè)體； （２）、魚類家系的建立；魚類為牙鲆日本群體和牙鲆黃海群體： ａ、牙鲆日本群體和黃海群體親魚的培育： 從日本引進(jìn)牙鲆魚苗，體長５厘米左右，經(jīng)過３－４年的培育，魚苗達(dá)到性成熟，用于建立牙鲆家系；黃海野生群體親魚為捕撈的野生個(gè)體，采用常規(guī)方法進(jìn)行馴養(yǎng)和繁殖； 采用電子標(biāo)記法對(duì)抗病群體、日本群體以及黃海野生群體３個(gè)群體親魚進(jìn)行個(gè)體標(biāo)記，每尾親魚給一個(gè)標(biāo)記號(hào)，以便配對(duì)繁殖時(shí)識(shí)別親魚來源； ｂ、精、卵的采集與人工授精： 利用人工擠壓腹部法分別采集成熟卵，擠壓并用吸管吸取成熟精子于干燥的玻璃瓶中；采用干法受精，即將擠出的精液加到盛卵的容器中，搖動(dòng)混合，然后加入海水激活，完成授精過程，再加１０倍于卵量的海水，靜置５－１０分鐘，好卵漂浮在上面，而未受精的死卵則沉于水底，將上浮卵移入孵化缸中孵化，胚胎發(fā)育至原腸早期統(tǒng)計(jì)受精率，發(fā)育至出膜前期統(tǒng)計(jì)孵化率； ｃ、牙鲆家系的建立： 在牙鲆繁殖季節(jié)，采用抗病群體、日本群體和黃海野生群體３個(gè)繁殖群體作為親本進(jìn)行配對(duì)繁殖；采用抗病牙鲆♂ｘ抗病牙鲆♀、抗病牙鲆♂ｘ日本牙鲆♀；日本牙鲆♂ｘ抗病牙鲆♀、日本牙鲆♂ｘ日本牙鲆♀；黃海野生牙鲆♂ｘ抗病牙鲆♀、黃海野生牙鲆♂ｘ日本牙鲆♀，分別以１尾雄魚對(duì)１尾雌魚的交配方式構(gòu)建家系，有時(shí)是１尾雄魚分別對(duì)２－４尾雌魚，或１尾雌魚分別對(duì)２－５尾雄魚的交配方式構(gòu)建半同胞家系；精、卵采集及孵化按上述方法進(jìn)行；將來自一尾雄魚和一尾雌魚交配產(chǎn)生的受精卵，即一個(gè)家系，放在一個(gè)３立方米體積的水槽中進(jìn)行孵化，放養(yǎng)密度為２０－３０毫升受精卵，水槽實(shí)行２４小時(shí)微流水、充氣；家系的建立工作應(yīng)在１０－２０天內(nèi)完成； （３）、不同家系的標(biāo)記方法： 采用不同顏色的熒光染料注射魚苗的不同部位，將配制好的不同顏色的熒光染料注入魚體表皮下，每針注射劑量為３－５μｌ；選取黃、紅、橙３種熒光顏料，在魚體腹部上選取了背前、背后、腹后３個(gè)位置，利用排列組合法設(shè)計(jì)了標(biāo)記組合，按１個(gè)部位１種顏色，１個(gè)部位２種顏色和１個(gè)部位３種顏色進(jìn)行排列組合，共計(jì)有３３７５個(gè)排列組合，即利用３種顏色在３個(gè)不同部位注射，可以標(biāo)記３３７５個(gè)家系。
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| 專利號(hào): |
200810138063 |
| 申請(qǐng)日: |
2008年7月8日 |
| 公開/公告日: |
2008年11月19日 |
| 授權(quán)公告日: |
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| 申請(qǐng)人/專利權(quán)人: |
中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 |
| 國家/省市: |
青島(95) |
| 郵編: |
266071 |
| 發(fā)明/設(shè)計(jì)人: |
陳松林、田永勝、徐田軍、鄧寒、沙珍霞、劉本偉、季相山、于過才 |
| 代理人: |
袁和善 |
| 專利代理機(jī)構(gòu): |
青島市專利服務(wù)中心(37101) |
| 專利代理機(jī)構(gòu)地址: |
山東省青島市中山路1號(hào)(266001) |
| 專利類型: |
發(fā)明 |
| 公開號(hào): |
101305701 |
| 公告日: |
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| 授權(quán)日: |
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| 公告號(hào): |
000000000 |
| 優(yōu)先權(quán): |
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| 審批歷史: |
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| 附圖數(shù): |
2 |
| 頁數(shù): |
13 |
| 權(quán)利要求項(xiàng)數(shù): |
4 |
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